蛋白质中的肽键在碱性条件下和铜离子作用生成紫色物质,此反应需要在碱性条件下发生,先加CuSO4由于不是碱性条件,故而不放映,但是铜离子为重金属离子,会导致蛋白质变性、沉淀,沉淀后的蛋白质,再加入碱也不会生成紫色物质了