不是随意添加.酶切位点都加在引物的5‘端.这样在第一轮扩增后,就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端）.在接下来的扩增中每个产物就都会有了.PCR的时候可以耐受引物的5‘端由数个不匹配的碱基对.但是随着扩增的进行,产物都有这些位点后,就不存在不匹配的问题了