直接设计 只要包含了整个CDS区就可以哦，那CDS和ORF是一样的吗，怎么查找基因的CDS区啊恩差不多回事ORF是DNA上的 CDS是mRNA上的看你模板用的是基因组DNA还是cDNA了反正就是包含了起始密码子到终止密码子的那部分两边可以适当的延长这样引物的选择会更多一些对了，还有，设计的引物序列可不可以在ORF序列中吗那不是只能卡在头和尾了 不然P出来的东西就少了引物之外的ORF序列啦哦，知道了，还有如果一个基因序列与查找的它的ORF相差二三百个碱基的话，设计引物是用原序列好，还是ORF序列好啊唉 怎么不明白呢你得包含整个ORF 所以必须拿整个基因序列不然引物只能卡在ORF的首尾