只要制备胶等过程都没问题,marker也跑出条带了,那这种情况最有可能的原因还是质粒的浓度过低.所以,虽然OD值可测出来,但胶显示不出来,我就遇到过这样的情况,还算很普通的现象.下次再加大菌量就行.我们是自己配的试剂，没有用试剂盒，那你一般跑胶上样多少体系？一般高拷贝质粒一般上样5ul就足够了，在加1ul6*loading buffer.量够的话，1~3ul都能跑出条带。我觉得与上样体系关系不大，具体的我在举几种情况吧。1. 如果你加大菌量还没提出来，也许你的质粒是低拷贝的质粒。一般高拷贝质粒象PUC质粒通常5mL菌就差不多能提出来，但像PBI121这样低拷贝的质粒就需要加大菌量。菌量多大呢？至少20mL试试吧。像我现在因为质粒用量大，每次一提就是80mL菌量呢。当然一定注意菌量加大，溶液I、II、III一定要相应增大量。建议：提质粒时，可以顺便提一个高拷贝的质粒作为对照，验证提取体系的试剂、操作等。2. 如果对照质粒提出来了，而加大菌量还没提出来，那么最有可能要从菌上入手。最好使用冻存的菌重新活化再试试。如果菌在冰箱中放的太久，不排除影响质粒的表达。还有就是细节的问题，比如菌培养的时间是不是超过18小时，已经到了菌生长的衰亡期，这会影响质粒的表达。甚至培养前加的抗生素过没过效。这些虽是细节，但会影响整个实验的成败。