这需要根据你采用的引物序列对应的TM来估算,一般可以通过设计软件中给出的片段对应TM值,上下浮动2-3度作为退火温度.如果上下游引物TM值相差较大,那么建议采用touchdown（二阶段温度法）的方法进行扩增.