看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品.
如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了,如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子.
Western-blot的理论检出限很低,可以低至皮克级,但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素.