一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落.
二、稀释倒平板法
先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …）,然后分别取不同稀释液少许,与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出出菌落.如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的.随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养.稀释涂布法：
优点：可以计数,可以观察菌落特征.
缺点：吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延.
一般用于平板培养基的回收率计数!
稀释混合平板法：
优点：可以计数,吸收量为1ml,较方便.
优点：不能观察菌落特征.
一般用于菌落总数的计数!
平板划线法：
优点：可以观察菌落特征,对混合菌进行分离!缺点：不能计数