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荧光定量RT-PCR
可以在不同的反应管里加不同的探针,在一个反应板上同时做么?
如果可以,需要满足什么条件呢?
探针设计的注意事项都有什么啊?
人气:289 ℃ 时间:2020-05-18 06:56:31
解答
可以,这个叫做多重PCR,要求是你的探针是不同荧光检测的.
但是,还需要你进行条件的优化.
个人认为优化比较麻烦,而且还不如分开做的准确.我不是要把不同的探针加到同一个反应管里,我是想问,在不同的反应管里加单一探针,但是彼此加的探针不同,是否可以同时进行检测。需要满足什么条件可以的.你在选择plate的时候,不同的孔选择相对应的探针类型就可以了.比如有的探针是FAM的,你就选择FAM再选择扫描的孔;有的探针是HEX,你接着选择HEX后再选择扫描的孔.没有什么特别的条件.如果标记的荧光基团相同,用的引物不同,也可以么。因为我需要24种不同探针。那就更可以了呀!只要你的探针是一个孔一个就没问题.如果非要说什么条件,那就是在同样的PCR程序下,你的引物(不包括探针)能很好的扩增,并且融解曲线只有一个峰.也就是说你的不同的引物能够满足同一个PCR程序.
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