是不是镁离子的浓度有变化啊?你说的跑不出是什么样子?没有主带还是前面还有一条细细的带?如果是这样的话,最前面的是引物二聚体.
以前我也出现完全都是弥散的情况,完全没有带,作后检查是引物的问题.PCR我用成了M13.就错了,你检查下是不是搞混了?一般酶不会有问题,除非你没有冷冻它,失活了,BUFFER一般不会出问题的,呵呵.检查下吧：）