western blot用来检测蛋白表达的变化,而检测表达变化的前提就是,你每个孔跑得总蛋白量是相同的,如果上样量都不同,还怎么检测不同组间目的蛋白量的区别,这样内参就可以作为检测蛋白上样量是否相同的标准.内参一般选那...那是不是内参曝光一次，样品曝光一次呢？需要两张膜？哎呀呀，我没坐过western啊，东西都是文献看的，但是很多不懂，导致文献的图都看不懂，求大神指教啊！！肯定是在一张膜上做的啊。一般分这两种情况：一个是目的蛋白和内参蛋白的分子量相差较大，这个时候在转膜之后，可以从中间剪开，然后分别杂抗体之后，再同时曝光。第二种情况是两者分子量相差很小，很难剪开，毕竟转膜之后还看不到蛋白。此时可以有两个方法：一是先杂一个蛋白抗体，再杂另一个蛋白的抗体，然后再一起曝光；另一种是先做完一个蛋白到曝光完成，然后用一种特殊的试剂，可以把之前的抗原抗体复合物拉下来，然后在杂另外一个蛋白。