精密取相应对照品,加适当的溶剂溶解,分别精密量取1、2、3、4、5ml（或相应成梯度的量）,稀释成各个梯度的溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积为纵坐标,以浓度C为横坐标进行线性回归.在Excel中就直接可以绘制高效液相色谱法标准曲线.
有的色谱工作软件能直接绘制标准曲线.