DNA水解酶为一类可以将组成DNA分子的脱氧核糖核苷酸之间的连接（3’,5’-磷酸二酯键）打开的酶.
具体包括：DNA聚合酶α/引发酶（引发及后随链的部分合成）,DNA聚合酶δ（DNA复制主要酶）,增殖细胞核抗原（滑动夹子,与合成连接性有关）,拓扑异构酶（母链DNA拓扑异构化）,解（螺）旋酶（能解开DNA双螺旋）,单链DNA结合蛋白及复制蛋白（单链DNA结合作用）,复制因子C（参与滑动夹子的装配）,DNA连接酶（连接冈崎片段及参与修复）,核酸酶（去除RNA引物）,侧翼核酸内切酶（去除RNA引物）.
总体作用是在DNA复制过程中发挥的,在DNA复制过程中起到关键性的作用.
以上信息详见高等教育出版社《生物化学》一书第十二章：DNA的生物合成.