和一般的PCR引物设计原理相同,取决于添加的序列.和种属无关那一般 选用多少对引物呢？，预扩增为什么要加一个碱基，是为什么偏偏是那个碱基二不是其他的？我看到许多文献是加了A和T的文献一般说的都很粗，建议你搜一下“AFLP protocol”，有很多实验室的详细说明的。太长了，我贴不过来。其中有个Wolf lab的我看就很好。