因为革兰氏染色第一步初染,虽然说革兰氏阳性菌对结晶紫的吸附更加牢靠,但是这是相对于革兰氏阴性菌而言的,如果不停地用酒精冲洗,革兰氏阳性菌吸附的结晶紫也会被逐渐洗去,从而造成革兰氏阳性菌被误判为革兰氏阴性菌.
一般,在脱色时,肉眼观已经没有明显酒精脱色时,脱色即算完成,不应继续用酒精冲洗.