1 血要新鲜.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol.
2 可以稍多加一些Trizol,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,直接加三氯甲烷,混匀再去离心.
可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷.
3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解
4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时,或再适当延长一点时间.迅速离心,之后加75%乙醇.只洗一遍,洗2遍易损失部分RNA.
5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系.干燥一会就迅速加DEPC水少量.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水.
6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存.
RNA直接冻存会降解.也会影响以后反转的效率.