1.尽量选择厌氧固氮菌适合生长的环境采集土壤样本.
2.制备适合厌氧固氮菌的培养基,灭菌,备用.
3.将土壤样本中的大块杂质去除,再用水溶解,可用摇床慢速震荡.
4.梯度稀释,取不同浓度的土壤溶液涂板,每个浓度可设置5-10个重复.
5.培养.
6.在平板上挑取符合厌氧固氮菌菌落形态的菌落,尽量挑取单菌落,进行培养.
7.取培养后的菌液划线,划出单菌落最好.
8.培养.
9.挑取单菌落,用液态培养基活化,做革兰氏染色初步验证.
10.利用分子生物学做序列比对,确认所要筛选菌.
这里只是一个大概流程,自己做的时候总结出来的,实验的时候可能有些步骤要重复很多次,不要怕烦,筛选细菌是很枯燥的事,而且99%的细菌不能再实验室条件下培养,耐心点总会有结果的.