首先怀疑,特异性不好,解决办法：
1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍；
2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环（也就是在程序中多设置2步）；
3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul；
如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、引物和taq,重新提模板、重新稀释引物,以及用新的pcr试剂.
欢迎继续讨论,纯属手打,祝实验顺利!