1温度：温度影响分子的活动速度,20-40度是温度越高,结合越快,超过56度抗原抗体就会失活.
2抗原抗体的相对浓度：比例合适结合越好.否则会出现前、后带现象.
3金属离子;许多抗原抗体的反映需要金属离子参加.