A、使用单层尼龙布过滤研磨液，而不是使用定性滤纸，A错误；
B、将干燥处理过的定性滤纸条剪成长条，用于层析，B正确；
C、在划出一条滤液细线后，要待滤液干后，重复划线2～3次，C错误；
D、研磨叶片时，用无水乙醇或丙酮溶解色素，D错误．
故选：B．