想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶Not I 切点；该_数学解答

想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.
要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶Not I 切点；该基因将被连接到一信号肽编码序列（…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …）下游,可形成融合蛋白,上游引物的切点要满足需要.
EcoR I:GAATTC Not I:GCGGCCGC
1 acgcgcaaga ttaggtgggg cgccagagcc ggggcacctg cgcaggcttg gctgcgccct
61 ctcgcgccgc acgctctgcg ggttcctccc ttcttccgag cctctcctct ggccgccgcg
121 cgggagagag gccgagatgg cagatgagat tgccaaggct caggtcgctc ggcctggtgg
181 cgacacgatc tttgggaaga tcatccgcaa ggaaatacca gccaaaatca tttttgagga
241 tgaccggtgc cttgctttcc atgacatttc ccctcaagca ccaacacatt ttctggtgat
301 acccaagaaa catatatccc agatttctgt ggcagaagat gatgatgaaa gtcttcttgg
361 acacttaatg attgttggca agaaatgtgc tgctgatctg ggcctgaata agggttatcg
421 aatggtggtg aatgaaggtt cagatggtgg acagtctgtc tatcacgttc atctccatgt
481 tcttggaggt cggcaaatgc attggcctcc tggttaagca cgttttgggg ataattttct
541 cttctttagg caatgattaa gttaggcaat ttccagtatg ttaagtaaca cacttatttt
601 tgcctgtgta tggagagatt caagaaataa ttttaaaacc gcatacataa taaaagacat
661 tgttgcatgg cttatagtct ctctgagtgt tgcgtttgat ttgttatttt aaaaacatat
721 ttgttggaat atgtgaaggt gggtttataa ttttggatgt ttcttgcttt ttcttcccaa
781 gg
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人气：121 ℃　时间：2020-02-05 13:51:45

解答

上游引物：GAATTCacgcgcaaga ttagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER 5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KOD PLUS的话,就一般引物设计18~22个碱基,一般都能扩增出来）
下游引物：GCGGCCGCccttgggaagaaaaagc（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER 5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同）谢谢你，不过这个要求是什么意思啊“该基因将被连接到一信号肽编码序列（…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN…）下游，可形成融合蛋白”那要看你怎么构建载体了。方法一：你要么通过酶切的手段，把信号肽先连入载体中，再把基因连入信号肽后。或者先把基因连入载体中，再把信号肽连入载体中。方法二：做搭桥PCR。你搜索一下就知道了。汗！我没有绘图的工具，以前就面对面直接手写绘图解释了，现在只能帮到你这么多。