A、作为模板的DNA序列只要加进一次，起模板作用，A错误；
B、模板链只要加入一次，引物片段必须不断加入，DNA聚合酶、DNA连接酶可以反复使用，B正确；
C、反应需要的DNA聚合酶可以反复使用，不需要不断的加进到反应当中，C错误；
D、PCR扩增反应过程中不需要DNA连接酶，D错误．
故选：B．