退火在PCR中,是指模板双链DNA经热变性、双螺旋解开成单链后,通过缓慢冷却到55℃左右,使引物（即具有互补碱基的RNA片段）与该模板DNA单链重新配对,形成新的双链分子的过程.
退火能在互补的DNA或RNA之间形成双链DNA分子、双链RNA分子或RNA-DNA杂交分子,受温度、时间、DNA浓度、DNA顺序的复杂性等因素的影响.