PCR长的目的片段需要注意什么
我设计的引物溶解温度是56.3和60.9度,相差有些大.我的目的片段大概3.7Kbp.我用的天根的Taq酶用通用的时间退火温度56度P出来几百bp的片段,然后又延长退火时间到4分钟改退火温度为53度再P,结果什么也没P出来.怎么办?我在网上查了一下有说要用高保真酶LA Taq和invitrogen的Taq,我同学说我的第一步94度的时间4分钟太长了(不是30循环里的第一步)请问我应该选择什么试剂和什么反应条件才能P出我的目的片段?
人气:199 ℃ 时间:2020-06-06 20:39:56
解答
扩不出来应该是你的退火温度的问题.用不用高保真酶的区别就在于会不会在延长的时候出错.
你可以做一个梯度PCR,如果还是没有扩出来的,那就是你的药品问题了,buffer啊,dNTP啊,酶啊有问题、
推荐
- PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?
- pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子?
- pcr需要注意的问题
- PCR目的片段为2100BP到3000BP,用哪种酶效果会好点?
- 怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段
- 甲乙两人相距60千米,甲先出发2小时,乙再出发甲在后.甲的速度8Km1时,乙速度6km1时,甲几小时追上乙?
- 开展"嫦娥三号月球车全球征名活动"有哪些意义
- 一只狗走3步与一只猫走5步的距离相等,猫走一步相当于九厘米,猫走24步的距离狗要走多少步?
猜你喜欢