存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度；第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR体系内的各种物质浓度,看看能不能得到目的条带；如果反复试验都无法得到目的片段,那么就说明您的引物在基因组上可能存在2个或2个以上的结合位点,以至于无法得到合格的目的片段,这个时候就只能重新设计引物了.一般重新设计引物都能解决扩增问题的,祝好运