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CTAB 法提取DNA的原理和步骤?
人气:448 ℃ 时间:2020-02-06 06:38:04
解答
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中;
(2)加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯仿(各400μl)溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等体积的氯仿,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min.
(5)重复步骤(4)1-2次,以蛋白层不出现为止;
(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(7)弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀2次;
(8)室温下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用.
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