F:5‘-GTAGATGGACTTATGCCG-3’ Tm：47.8℃ 评分100
R:5'-GACTTCGACTACACTGCAC-3' Tm：47.2℃ 评分86 总体85分
正反引物有接近3‘端的交叉引物二聚体
反引物有接近3’端的引物二聚体
F:5‘-GTAGATGGACTTATGCCGTC-3’ Tm：52.2℃ 93分
R:5'-GACTTCGACTACACTGCACG-3' Tm“53.6℃ 86分 总体79分
正引物有3‘端发卡（貌似不严重）,正反引物分别有引物二聚体和交叉引物二聚体
两组都订了试试看吧~我觉得第一组好一些,但是就是Tm有点低.
使用primer premier 5 设计的
欢迎追问,我也可以把设计结果图发给你~真是谢谢哦！我也是用 premier 5 设计，但是引物都不是从第一个碱基开始的。估计我使用软件或者设置参数的有问题。那麻烦你把图发给我看看吧！tclzdlw@163.com。谢谢啦！已发送，请查收~~关于设置参数的问题你可以继续问我啊，或者我怎么样详细给你讲一下我使用的就是search的功能，那么我要如何设置参数才能得到你这样的结果呢？万分感谢！