就是加酶切位点了呗 一般长了是升高了 不过不用管酶切位点的也就是说，我的xxxxxNNNNN的Tm值和NNNNN一样了么？计算出来的值肯定不一样不过你做的时候还是按照原来的退火温度就行了 P不出来再调整谢谢啊~~~高手~~以后有不懂问你~~