引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.
长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
公式中,Size = 引物长度.