不用那么复杂
网上那都是扯淡的
主要是这么几点注意的：
1.碱基组成,GC的含量
2.引物长度
3.不能有反向重复和自身互补序列
4.Tm值
5.3端最好为G或C等等
设计时最好用软件弄一下
不用面面俱到
没有太大问题就行
其实相当简单