误差造成的原因太多了,这种情况最需避免的就是加样的时候造成了加样量之间的误差,建议多做几个重复,将重复中数据明显差距几个以上的循环的数据剔除.加样的时候样品混合好再分装.我做了三个复孔，每个复孔之间Ct值差距不超过0.5。单次的目的基因表达量与看家基因相比之后，对同一批次逆转录的cDNA再次进行realtime PCR,常常发现两次的相对表达量差异很大。比如A次的表达是5倍，B次的表达式0.5倍。为什么呢。谢谢看起来很正常嘛，没有啥差异啊。你要看最后的柱状图是差距很大嘛？我没有看出由上调变下调的情况啊。