双缩脲试剂由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO4溶液（0.01g/mL）配制而成,配制比例为5：1.但是双缩脲试剂不用现配现用,这是与斐林试剂不同的地方之一.
蛋白质在双缩脲试剂作用下会形成紫红色沉淀.