底物水平磷酸化是指物质在生物氧化过程中生成的一些含有高能键的化合物,它们可以不经电子传递链,而直接偶联ATP或GTP的合成,这种反应称为底物水平磷酸化.1,3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸的过程中被磷酸甘油酸激酶将磷酸基转到腺苷二磷酸上,生成ATP；丙酮酸激酶作用下,磷酸烯醇式丙酮酸转变为丙酮酸的过程中磷酸基转到腺苷二磷酸上生成ATP.底物水平磷酸化区别于氧化磷酸化,后者需经电子传递链生成ATP.