1．取细菌培养物1.5 mL 于5000 rpm离心1分钟,倾去上清液.
2．取沉淀加100 μL预冷的溶液I摇匀并悬浮细胞,再加200 μL预冷的溶液II摇匀后冰浴5分钟,最后加入150 μL预冷的溶液III摇匀后冰浴5分钟,12000 ×g离心5分钟或10000 ×g离心8分钟.这一过程可使大部分的质粒DNA被释放至上清液中.
3．取上清液加等体积的苯酚—氯仿—异戊醇,5000 ×g离心4分钟,再取上清液加入等体积氯仿于5000 rpm离心6分钟.这一步骤主要是为了去除上清液中的蛋白质和脂类等杂质.
4．取上清液加等体积异丙醇,室温放置5分钟后12000 ×g离心5分钟或10000 ×g离心8分钟.75%乙醇浸洗沉淀两次,冷冻干燥后保存于冷乙醇中或直接超低温保存.（这就是细菌DNA提取的步骤）